摘要： 您好,今天小編胡舒來為大家解答以上的問題。pcr技術原理是什么，pcr技術原理相信很多小伙伴還不知道,現(xiàn)在讓我們一起來看看吧！1、PCR原理：DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重...

您好,今天小編胡舒來為大家解答以上的問題。pcr技術原理是什么，pcr技術原理相信很多小伙伴還不知道,現(xiàn)在讓我們一起來看看吧！

1、PCR原理：DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。

2、雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子拷貝。

3、PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。

4、PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板DNA與引物的退火（復性）：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；③引物的延伸：DNA模板--引物結合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基互補配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈。

5、重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。

6、每完成一個循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。

7、擴展資料：特異性強 PCR反應的特異性決定因素為：①引物與模板DNA特異正確的結合；②堿基配對原則；③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；④靶基因的特異性與保守性。

8、其中引物與模板的正確結合是關鍵。

9、引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。

10、聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。

11、再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

12、靈敏度高 PCR產物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。

13、能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中最小檢出率為3個細菌。

14、PCR反應的延伸溫度一般選擇在70～75℃之間，常用溫度為72℃，過高的延伸溫度不利于引物和模板的結合。

15、PCR延伸反應的時間，可根據(jù)待擴增片段的長度而定，一般1Kb以內的DNA片段，延伸時間1min是足夠 的。

16、3～4kb的靶序列需3～4min；擴增10Kb需延伸至15min。

17、延伸進間過長會導致非特異性擴增帶的出現(xiàn)。

18、對低濃度模板的擴增，延伸時間要稍長些。

19、循環(huán)次數(shù) 循環(huán)次數(shù)決定PCR擴增程度。

20、PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。

21、一般的循環(huán)次數(shù)選在30～40次之間，循環(huán)次數(shù)越多，非特異性產物的量亦隨之增多。

22、參考資料：百度百科——PCR擴增。

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