摘要： 您好,今天小編胡舒來為大家解答以上的問題。動物dna提取方法，dna提取方法和步驟相信很多小伙伴還不知道,現(xiàn)在讓我們一起來看看吧！1、對一些DNA提取方法的總結細菌DNA的提?。海?..

您好,今天小編胡舒來為大家解答以上的問題。動物dna提取方法，dna提取方法和步驟相信很多小伙伴還不知道,現(xiàn)在讓我們一起來看看吧！

1、對一些DNA提取方法的總結細菌DNA的提?。海ㄒ唬┰噭?. 抽提緩沖液2% CTAB (W/V)2% PVP K25 (w/v) （去色素）100mM Tris-HCl (pH8.0)25mM EDTA (pH8.0)2.0M NaCl2.10M LiCl3. 2M LiCl4.DEPC-water（抑制RNA酶活性）5. 3M NaAc (pH5.2)6. 96% 乙醇7. 70% 乙醇步驟：1.抽提緩沖液65℃預熱；2. 加菌體到已經預熱的緩沖液（700ul）中混勻，65℃，10min；3. 加酚/氯仿/異戊醇（25：24：1），振蕩，離心12,000rpm，10min；4.取上清，加氯仿/異戊醇（24：1）振蕩，離心12,000rpm，10min； 5. 取上清，重復4步驟；6. 加入1/10體積的3M醋酸鈉和1.5倍體積的乙醇（或加入等體積的異丙醇），－20C沉淀；11. 離心12,000rpm，10min；12. 棄上清，70％乙醇洗，也可以再用100％乙醇洗，然后溶解于100ml 水中。

2、(二)（我們常用的方法，但是有時有些細菌特別不好提，就用上面的方法）1. 將菌株接種于液體LB培養(yǎng)基，37℃震蕩培養(yǎng)過夜。

3、2. 取1.5ml培養(yǎng)物12000rpm離心2min。

4、3. 沉淀物加入567 ul的TE緩沖液，反復吹打使之重新懸浮，加入30ul 10%SDS和15ul的蛋白酶K，混勻，于37℃溫育1h.4. 加入100ul 5mol/L NaCl, 充分混勻，再加入80ul CTAB/NaCl溶液，混勻后再65℃溫育10min。

5、5. 加入等體積的酚/氯仿/異戊醇混勻，離心4-5min, 將上清轉入一只新管中，加入0.6-0.8倍體積的異丙醇，輕輕混合直到DNA沉淀下來，沉淀可稍加離心。

6、6. 沉淀用1ml的70%乙醇洗滌后，離心棄乙醇．真菌DNA的提取：（一）1.取真菌菌絲0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉2.加入4mL提取液，快速振蕩混勻3.加入等體積的4mL的氯仿:異戊醇(24:1)，渦旋3～5min（此處是粗提沒有加酚，可以節(jié)約成本的喲?。?.1000rpm，4℃，5min5.上清用體積的氯仿:異戊醇(24:1)再抽提一次（10,000 rpm，4℃離心5 min）6.取上清，加入2/3倍體積的-20℃預冷異丙醇或2.5倍體積的無水乙醇沉淀, 混勻, 靜置約30 min7.用毛細玻棒挑出絮狀沉淀, 用75%乙醇反復漂洗數(shù)次, 再用無水乙醇漂洗1次, 吹干，重懸于500 ?ulTE中8.加入1 ul RNaseA （10 mg/mL），37℃處理1 hr9.用酚（pH8.0）:氯仿:異戊醇(25:24:1)和氯仿:異戊醇(24:1)各抽提1次（10,000 rpm，4℃離心5 min） 10.取上清，1/10V 3M NaAc,2.5V體積的無水乙醇, -70℃沉淀30 min以上11.沉淀用75%乙醇漂洗，風干, 溶于200 ulTE中，-20 ℃保存?zhèn)溆肈NA提取液：0.2M Tris-HCl（pH 7.5），0.5M NaCl，0.01M EDTA，1％SDS，3M NaAc （二）1.真菌菌絲0.5-1 g, 在液氮中迅速研磨成粉2.加入3 mL 65℃預熱的DNA提取緩沖液，快速振蕩混勻65℃水浴30 min, 期間混勻2-3次3．加入1 mL 5M KAc，冰浴20 min4．等體積的氯仿:異戊醇(24:1)抽提1次（10,000 rpm，4℃離心5 min）5．取上清，加入2/3倍體積的-20℃預冷異丙醇, 混勻, 靜置約30 min6．用毛細玻棒挑出絮狀沉淀, 用75%乙醇反復漂洗數(shù)次, 再用無水乙醇漂洗1次, 吹干，重懸于500 ?L TE中7．加入1 ul RNaseA （10 mg/mL），37℃處理1 hr8．用酚（pH8.0）:氯仿:異戊醇(25:24:1)和氯仿:異戊醇(24:1)各抽提1次（10,000 rpm，4℃離心5 min） 9．取上清，1/10V 3M NaAc,2.5V體積的無水乙醇, -70℃沉淀30 min以上10．沉淀用75%乙醇漂洗，風干, 溶于200 ul TE中，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

7、以上是我們常用的方法．。

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